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“黄曲霉毒素B1单克隆抗体”参数说明
| 种类： | 单克隆抗体 | 有效期： | 36个月 |
“黄曲霉毒素B1单克隆抗体”详细介绍
以免疫分析为基础的准确、快速、无污染、智能化检测技术已成为AFB1快速检测方法研究的热点。其中免疫亲和层析技术由于其对AFT的提取效率高、净化程度高,越来越受研究人员的推崇,该方法是目前公认的最有效的AFB1净化方法。而高亲和力、高灵敏度、质量稳定的抗体是建立理想检测方法的前提,是应首先解决的问题。抗AFB1单克隆抗体的制备和特性鉴定及其免疫亲和柱的初步研制。目的:通过杂交瘤细胞技术制备抗AFB1单克隆抗体,并对所制备的单克隆抗体进行特性鉴定和初步应用。方法:（1）以AFB1-BSA作为抗原免疫BALB/c小鼠;（2）取免疫效果最佳的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;（3）以AFB1-OVA作为检测抗原,通过酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测杂交瘤细胞的上清进行筛选,保留阳性孔,用有限稀释法进行三次克隆化,得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;（4）探索大量制备和纯化所得抗体的方法和条件;（5）鉴定对所得单克隆抗体的特性（6）初步应用该单克隆抗体,研制AFB1免疫亲和柱。结果:（1）得到一株能稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5E10。此单克隆抗体的亚类为IgG2b,亲和常数是4.79×108M-1,与AFB2、AFG1、AFG2、AFM1的交叉反应率分别为6个/只,10天后便可采集腹水;辛酸硫酸铵法（CA-AS）适用于该单抗的大量纯化。（3）初步制备AFB1单抗免疫亲和柱,采用荧光分光光度法确定AFB1单抗免疫亲和柱的使用条件。使用条件为:5mL 0.01M PBS（pH7.4）平衡;上样缓冲液中甲醇浓度为10%;上样后2mL超纯水洗涤;1mL80%甲醇-水洗脱,20mL0.01M PBS（pH7.4）再生。制备的AFB1单抗免疫亲和柱其抗体浓度与柱容量的关系为y=85.63x-0.043,其中R2=0.9732。制备柱容量为40ng的免疫亲和柱,使用1次后,柱容量下降至原柱容量的43.6%。
